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基因工程车间之蛋白分离纯化

作者: 金沙国际唯一官网网址发表时间:2020-11-30 17:58:24浏览量:56

基因工程车间之蛋白分离纯化 蛋白质的分离纯化是生物产业中的核心技术,是基因工程车间制药产业中的重要环节;分离和纯化重组蛋白的基本原则是捕获、粗纯、精纯,分离和纯化的一般流程是:首先对生物材料进行前期...
文本标签:基因工程车间,蛋白分离纯化,基因工程车间建设

基因工程车间之蛋白分离纯化

蛋白质的分离纯化是生物产业中的核心技术,是基因工程车间制药产业中的重要环节;分离和纯化重组蛋白的基本原则是捕获、粗纯、精纯,分离和纯化的一般流程是:首先对生物材料进行前期处理,将重组蛋白与细胞分离开来,然后根据所要纯化的蛋白质的性质选择适当的分离和纯化方法,如依据蛋白的等电点,在不同盐溶液中的溶解度等性质可采用沉淀分离法;依据蛋白分子量可采用膜分离技术;依据电荷差异、分子大小、疏水性和与其他生物分子之间亲和力的专一性等选择离子交换层析、分子筛层析、疏水层析和层析技术。

蛋白样品的预处理,前期处理过程中一般要涉及细胞或菌体的分离或富集,采用离心和过滤的方法,这就要求发酵液和培养液的状态有利于提高固液分离的速度;基因工程菌株和细胞的发酵液或培养液的预处理就是在保证蛋白质生物活性稳定的前提下通过调节PH、加热等处理来降低溶液的黏度,改变溶液的性质,使其状态更有利于后续操作。基因工程菌株和细胞表达的产物,有的可以分泌到细胞外,但大部分存在于细胞内,只有将细胞破碎后才可以使胞内的产物最大地释放到液相中,以便进行进一步提取,细胞破碎的方法有机械破碎法和非机械破碎法;非机械破碎法,主要是利用物理因素、生物化学物质作用使细胞破碎,主要包括冻融法、化学裂解法、酶解法等;机械破碎法主要是利用液相和固相的机械作用力使细胞破碎。细胞破碎后的匀桨中含有大量的细胞碎片,必须将其分离出去后才能进一步提取分离,目前主要是利用过滤、离心、水相萃取等方法。金沙国际唯一官网网址可提供洁净车间、基因工程洁净车间的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。

膜分离技术是以高分子分离膜为代表的流体分离操作技术,由于膜分离技术具有许多其他分离技术所没有的优点:浓缩不需要变相、分离系数大、分离选择性强而且不需要蒸发器或冷冻设备,投资成本低、能源消耗少;膜分离技术具有诸多的优点和重要性,被广泛应用于生物和食品工业、环境工程、制药工业等诸多方面。膜分离技术是用半透膜作为选择障碍层,在膜的两侧存在一定量的能量差作为动力,允许某些组分透过而保留混合物中其他组分,各组分头透过膜的迁移率不同,从而达到分离目的的技术;膜是具有选择性分离功能的材料,利用膜的选择性分离实现料液的不同组分的分离、纯化、浓缩,它与传统过滤的不同在于,膜可以在分子范围内进行分离,并且这个过程是一种物理过程,不需要发生相的变化和添加助剂,膜的孔径一般为微米级,依据其孔径的不用,可将膜分为微滤膜、超滤膜、纳滤膜和反渗透膜;根据材料的不同,可分为无机膜和有机膜,无机膜主要是陶瓷膜和金属膜,其过滤精度较低,选择性较小。


基因工程车间建设


  超滤是介于微滤和纳滤之间的一种膜过程,膜孔径在0.05-1000μm之间,超滤是一种能够将溶液进行净化、分离、浓缩的膜分离技术,以膜两侧的压力差为驱动力,以超滤膜为过滤介质,在一定的压力下,当水流过膜表面时,只允许水及比膜孔径小的小分子物质通过,达到溶液的净化、分离和浓度的目的。微滤属于精密过滤,基本原理是筛孔分离过程,微孔滤膜的应用范围主要是从气相和液相中截留微粒、细菌以及其他污染物,以达到净化、分离、浓缩的目的。纳滤是介于超滤与反渗透之间的一种膜分离技术,其截留分子量在80-1000Da范围内,孔径为几纳米,基于纳滤分离技术的优越性,其在生物化工、制药、食品工业等诸多领域有广阔的应用前景。


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